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本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血清、血浆、羊水、尿液等无细胞体液中提取游离DNA。本试剂盒采用可以特异性结合核酸的吸附柱和独特的缓冲液系统，样品裂解后，游离DNA在高盐条件下与硅胶膜结合，在低盐、高pH值时游离DNA从硅胶膜上洗脱下来。本试剂盒使用负压法，同时配备延伸管，可处理多达5mL样本，纯化的DNA产量高、质量好，最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染。纯化得到的游离DNA质量稳定、可靠，可直接用于PCR、荧光定量PCR和二代测序等分子生物学实验。

• 适合大体积样本：试剂盒使用负压法，配备延伸管，配套使用负压装置可将样品处理量提高至5mL。
  
• 提取得率高：使用高效微量吸附柱结合目的片段，有效提升核酸的回收率，洗脱体积可在10～150μL之间灵活变化，可浓缩低浓度核酸。
  
• 纯度高：经纯化和浓缩的游离DNA不含蛋白、核酸酶和其他杂质，可即用于下游各种应用，包括PCR、荧光定量PCR、二代测序等。

• 向每管蛋白酶K粉末中加入指定用量(10次加5mL/50次每瓶加9mL)的蛋白酶K储存液，使其完全溶解后-20℃保存。配制好的蛋白酶K勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。其它组分可以在干燥、室温(15～30℃)环境下稳定保存一年。如需保存更长时间，可置于2～8℃。
  
• 样品应避免反复冻融，否则会导致DNA提取量下降。
  
• 本试剂盒最多可以从5mL血清血浆、4mL尿液中提取cfDNA。
  
• 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer CB中加入异丙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。
  
• 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。
  
• 使用前请检查Buffer CL、Buffer CB是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer CL、Buffer CB于56℃水浴孵育重新溶解，混匀后使用。
  
• 实验开始前将水浴锅预热至60℃。
  
• 可将洗脱缓冲液Buffer EBL预热至60℃。
  
• 需准备负压装置。

• 样品处理：向离心管(自备)中加入1mL血清/血浆样本，若样本不足1mL，加入PBS溶液补至1mL体积。
  注意：当样品量超过1mL时，请等比例增加蛋白酶K、Buffer CL和Buffer CB试剂用量，具体
  
• 向以上溶液中加入100μL蛋白酶K，混匀。
  
• 加入800μL Buffer CL，剧烈震荡至少30秒。
  
• 60℃孵育30分钟，其间颠倒混匀数次。
  
• 加入1800μL Buffer CB(使用前检查是否加入异丙醇)，颠倒混匀10次或剧烈震荡15～30秒。
  
• 冰浴5分钟。
  
• 正确连接负压装置，将连接管插到负压装置的插口上。
  
• 将吸附柱插入到连接管上。
  
• 将延伸管插入开盖的吸附柱中。
  注意：确保连接管、吸附柱和延伸管连接稳固，防止发生漏液。
  
• 将冰浴后的混合溶液全部加入延伸管中，开启并调节负压至-900～-800 mbar，缓慢吸走管中溶液。待溶液完全吸走，关闭负压开关，当压力恢复至0 mbar时，小心移去延伸管。
  
• 向吸附柱中加入500μL Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇)，开启并调节负压至-900～-800 mbar，待溶液完全吸走，关闭负压开关。
  
• 向吸附柱中加入750μL Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇)，开启并调节负压至-900～-800 mbar，待溶液完全吸走，关闭负压开关。
  
• 向吸附柱中加入750μL无水乙醇，开启并调节负压至-800～-900 mbar，待溶液完全吸走，关闭负压开关。
  
• 当压力恢复至0 mbar时，将吸附柱取下，置于新的收集管中，12000rpm离心3分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
  注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应。
  
• 将吸附柱置于新的1.5mL离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20～150μL Buffer EBL，室温放置3分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。